2025版中國藥典0713脂肪與脂肪油測定法內(nèi)容介紹

更新時間：2025-12-18 | 點(diǎn)擊率：11

0713　脂肪與脂肪油測定法

本法適用于供藥用或藥用輔料的脂類物質(zhì)及類似物（不包括揮發(fā)油）的測定。

液體供試品如因析出硬脂發(fā)生渾濁時，應(yīng)先置50℃的水浴上加熱，使完quan熔化成澄清液體；加熱后如仍顯渾濁，可離心沉降或用干燥的保溫濾器濾過使澄清；將得到的澄清液體攪勻，趁其尚未凝固，用附有滴管的稱量瓶或附有玻勺的稱量杯，分別稱取下述各項(xiàng)檢驗(yàn)所需的供試品。固體供試品應(yīng)先在不高于其熔點(diǎn)10℃的溫度下熔化，離心沉降或?yàn)V過，再依法稱取。

相對密度　照相對密度測定法（通則0601）測定。

折光率　照折光率測定法（通則0622）測定。

熔點(diǎn)　照熔點(diǎn)測定法（通則0612第二法）測定。

酸值　酸值系指中和供試品1g中含有的游離脂肪酸所需氫氧化鉀的重量（mg），但在測定時可采用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）進(jìn)行滴定。

除另有規(guī)定外，按下表中規(guī)定的重量，精密稱取供試品，置250ml錐形瓶中，加乙醇-乙mi（1∶1）混合液[臨用前加酚酞指示液1.0ml，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）調(diào)至微顯粉紅色]50ml，振搖使完quan溶解（如不易溶解，緩慢加熱回流使溶解），用氫氧化鈉滴定液（0.1 mol/L）滴定，至粉紅色持續(xù)30秒不褪。以供試品消耗氫氧化鈉滴定液（0.1 mol/L）的體積（ml）為A，供試品的重量（g）為W，照下式計算酸值：

羥值　羥值系指供試品1g中含有的羥基，經(jīng)用以下方法?；螅铓溲趸浀闹亓浚╩g）。

除另有規(guī)定外，按下表中規(guī)定的重量，精密稱取供試品，置250ml的干燥碘瓶中，精密加入酰化劑（取對甲苯磺酸14.4g，置500ml碘瓶中，加乙酸乙酯360ml，振搖溶解后，緩緩加入醋酐120ml，搖勻，放置3日后用）5ml，用吡啶少許濕潤瓶塞，稍擰緊，輕輕搖動使完quan溶解，置50℃±1℃水浴中25分鐘（每10分鐘輕輕搖動）后，放冷，加吡啶-水（3∶5）20ml, 5分鐘后加甲酚紅-麝香草酚藍(lán)混合指示液8～10滴，用氫氧化鉀（或氫氧化鈉）滴定液（1mol/L）滴定至溶液顯灰藍(lán)色或藍(lán)色；同時做空白試驗(yàn)。以供試品消耗的氫氧化鉀（或氫氧化鈉）滴定液（1mol/L）的體積（ml）為A，空白試驗(yàn)消耗的體積（ml）為B，供試品的重量（g）為W，供試品的酸值為D，照下式計算羥值：

碘值　碘值系指當(dāng)供試品100g充分鹵化時所需的碘量（g）。

除另有規(guī)定外，取供試品適量[其重量（g）約相當(dāng)于25/供試品的最da碘值]，精密稱定，置250ml的干燥碘瓶中，加三氯甲wan10ml，溶解后，精密加入溴化碘溶液25ml，密塞，搖勻，在暗處放置30分鐘。加入新制的碘化鉀試液10ml與水100ml，搖勻，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定剩余的碘，滴定時注意充分振搖，待混合液的棕色變?yōu)榈S色，加淀粉指示液1ml，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失；同時做空白試驗(yàn)。以供試品消耗硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）的體積（ml）為A，空白試驗(yàn)消耗的體積（ml）為B，供試品的重量（g）為W，照下式計算碘值：

過氧化值　過氧化值系指供試品1000g中含有的其氧化力與一定量的氧相當(dāng)?shù)倪^氧化物量。

除另有規(guī)定外，取供試品5g，精密稱定，置250ml碘瓶中，加三氯甲wan-冰醋酸（2∶3）混合液30ml，振搖溶解后，加入碘化鉀試液0.5ml，準(zhǔn)確振搖萃取1分鐘，然后加水30ml，用硫代硫酸鈉滴定液（0.01mol/L）滴定。滴定時，注意緩慢加入滴定液，并充分振搖直至黃色幾乎消失，加淀粉指示液5ml，繼續(xù)滴定并充分振搖至藍(lán)色消失，同時做空白試驗(yàn)。空白試驗(yàn)中硫代硫酸鈉滴定液（0.01mol/L）的消耗量不得過0.1ml。以供試品消耗硫代硫酸鈉滴定液（0.01mol/L）的體積（ml）為A，空白試驗(yàn)消耗硫代硫酸鈉滴定液（0.01mol/L）的體積（ml）為B，供試品的重量（g）為W，照下式計算過氧化值：

皂化值　皂化值系指中和并皂化供試品1g中含有的游離酸類和酯類所需氫氧化鉀的重量（mg）。

除另有規(guī)定外，取供試品適量[其重量（g）約相當(dāng)于250/供試品的最da皂化值]，精密稱定，置250ml回流瓶中，精密加入0.5mol/L氫氧化鉀乙醇溶液25ml，加熱回流30分鐘，然后用乙醇10ml沖洗冷凝器的內(nèi)壁和塞的下部，加酚酞指示液1.0ml，用鹽酸滴定液（0.5mol/L）滴定剩余的氫氧化鉀，至溶液的粉紅色剛好褪去，加熱至沸，如溶液又出現(xiàn)粉紅色，再滴定至粉紅色剛好褪去；同時做空白試驗(yàn)。以供試品消耗的鹽酸滴定液（0.5mol/L）的體積（ml）為A，空白試驗(yàn)消耗的體積（ml）為B，供試品的重量（g）為W，照下式計算皂化值：

不皂化物　除另有規(guī)定外，取供試品約5g，精密稱定，置250ml回流瓶中，加氫氧化鉀乙醇溶液（取氫氧化鉀12g，加水10ml溶解，用乙醇稀釋至100ml，搖勻）50ml，水浴加熱回流1小時，放冷至25℃以下，移至帶有聚四氟乙烯活塞的分液漏斗中，用水洗滌回流瓶2次，每次50ml，洗液并入分液漏斗中。用乙mi提取3次，每次100ml；合并乙mi提取液，用水洗滌乙mi提取液3次，每次40ml，靜置分層，棄去水層；依次用3%氫氧化鉀溶液與水洗滌乙mi層各3次，每次40ml，再用水40ml反復(fù)洗滌乙mi層直至最后洗液中加酚酞指示液2滴不顯紅色。轉(zhuǎn)移乙mi提取液至已恒重的蒸發(fā)皿中，并用乙mi10ml洗滌分液漏斗，洗液并入蒸發(fā)皿中，置50℃水浴上蒸去乙mi，用丙酮6ml溶解殘渣，空氣流下?lián)]去丙酮。在105℃干燥至連續(xù)兩次稱重之差不超過1mg，計算不皂化物。

取干燥后的殘渣，用中性乙醇20ml溶解殘渣，加酚酞指示液數(shù)滴，用乙醇制氫氧化鈉滴定液（0.1 mol/L）滴定至粉紅色持續(xù)30秒不褪色，如果消耗乙醇制氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）超過0.2ml，殘渣總量不能當(dāng)作不皂化物重量，試驗(yàn)必須重做。

甾醇組成　取不皂化物項(xiàng)下經(jīng)乙醇制氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定至終點(diǎn)且滿足要求的溶液，水浴蒸干，殘渣加丙酮6ml溶解，室溫?fù)]發(fā)至干，殘渣在105℃干燥約15分鐘，作為供試品。另取葵花籽油，同法制備不皂化物并同法處理，作為對照。

甾醇的分離　取供試品，用乙mi溶解3次，每次4ml，轉(zhuǎn)移至試管中，氮?dú)饬飨聯(lián)]發(fā)至干，加流動相適量溶解殘渣（必要時，可加異丙醇1～3滴以促溶），制成每1ml中約含殘渣40mg的溶液，用0.45μm濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取上述對照，同法操作，作為對照溶液；取膽固醇和β-谷甾醇各適量，分別加流動相溶解并稀釋制成每1ml中約含40mg的溶液，作為膽固醇和β-谷甾醇定位用溶液。照高效液相色譜法（通則0512）試驗(yàn)，用硅膠為填充劑（4.6mm×250mm, 5μm；預(yù)柱4.6mm×5mm, 5μm），以異丙醇-正己烷（1∶99）為流動相，流速為每分鐘1.0ml，檢測波長為210nm。取對照溶液、供試品溶液、膽固醇和β-谷甾醇定位用溶液各50μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，對照溶液應(yīng)在23～32分鐘顯示兩個主要的色譜峰，收集對照溶液、供試品溶液、膽固醇和β-谷甾醇定位用溶液約20分鐘至32分鐘間的洗脫液（注：收集起始時間以膽固醇的出峰時間為準(zhǔn)），分別置試管中，每個試管收集兩次進(jìn)樣所得的洗脫液，氮?dú)饬飨聯(lián)]發(fā)至干。

甾醇的測定　避免潮濕。取甾醇的分離項(xiàng)下供試品溶液制得殘渣，加無水吡啶0.2ml，加N，O-雙（三甲基硅烷）三氟乙酰an（BSTFA）-三甲基氯硅烷（TMCS）（99∶1）混合液0.2ml，密封，混勻，80℃加熱20分鐘，取出，放冷，取液體層作為供試品衍生化溶液。另取甾醇的分離項(xiàng)下對照溶液、膽固醇與β-谷甾醇定位用溶液制得殘渣，分別自“加無水吡啶0.2ml"起同法操作，取液體層分別作為對照衍生化溶液、膽固醇衍生化溶液和β-谷甾醇衍生化溶液。照氣相色譜法（通則0521）測定，采用以5%苯基-95%甲基聚硅氧烷為固定液的毛細(xì)管色譜柱（0.25mm×30m, 0.25μm），以氦氣為載氣，起始溫度為260℃，維持50分鐘，以每分鐘5℃的速率升溫至290℃，維持5分鐘，進(jìn)樣口溫度為290℃，檢測器溫度為290℃。取對照衍生化溶液1～3μl（視甾醇量而選擇），注入氣相色譜儀，記錄的色譜圖中，應(yīng)顯示4個主要的色譜峰，分別為菜油甾醇峰、豆甾醇峰、β-谷甾醇峰和Δ7-豆甾醇峰，菜油甾醇峰與豆甾醇峰的分離度應(yīng)不小于4.0。另取與對照衍生化溶液相同進(jìn)樣體積的膽固醇衍生化溶液、β-谷甾醇衍生化溶液和供試品衍生化溶液，分別注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，按表1相對β-谷甾醇峰的相對保留時間鑒別各甾醇峰，計算從膽固醇到Δ7-燕麥甾醇15個峰的總峰面積，按面積歸一化法計算供試品中各甾醇的含量。

表1　相對β-谷甾醇峰的相對保留時間

脂肪酸凝點(diǎn)　（1）脂肪酸的提取　取20%（g/g）氫氧化鉀的甘油溶液75g，置800ml燒杯中，加供試品50g，于150℃在不斷攪拌下皂化15分鐘，放冷至約100℃，加入新沸的水500ml，攪勻，緩緩加入硫酸溶液（1→4）50ml，加熱至脂肪酸明顯分離為一個透明層；趁熱將脂肪酸移入另一燒杯中，用新煮沸的水反復(fù)洗滌，至洗液加入甲基橙指示液顯黃色，趁熱將澄清的脂肪酸放入干燥的小燒杯中，加無水乙醇5ml，攪勻，用小火加熱至無小氣泡逸出，即得。

（2）凝點(diǎn)的測定　取按上法制得的干燥脂肪酸，照凝點(diǎn)測定法（通則0613）測定。

脂肪酸組成　除另有規(guī)定外，取供試品0.1g，置50ml回流瓶中，加0.5mol/L氫氧化鈉甲醇溶液4ml，在水浴中加熱回流直至油滴消失（通常約10分鐘），放冷，加14%三氟化peng甲醇溶液5ml，再在水浴中加熱回流2分鐘，放冷，加正庚烷4ml，繼續(xù)在水浴中加熱回流1分鐘后，放冷，加飽和氯化鈉溶液10ml，搖勻，靜置使分層，取上層液，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，作為供試品溶液；分別取硬脂酸甲酯、棕櫚酸甲酯和油酸甲酯適量，用正庚烷溶解并稀釋制成每1ml中各約含0.1mg的溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。照氣相色譜法（通則0521）試驗(yàn)，采用以聚乙二醇（或極性相近）為固定液的毛細(xì)管色譜柱（0.53mm×30m, 1.0μm），起始溫度為70℃，維持2分鐘，以每分鐘5℃的速率升溫至240℃，維持24分鐘；進(jìn)樣口溫度為220℃；檢測器溫度為260℃。取系統(tǒng)適用性溶液1μl注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，棕櫚酸甲酯峰和硬脂酸甲酯峰相對于油酸甲酯峰的保留時間分別約為0.87和0.99，理論板數(shù)按油酸甲酯峰計算不低于10 000，各色譜峰的分離度應(yīng)符合要求。取供試品溶液1μl，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，按面積歸一化法計算各脂肪酸甲酯的含量。

加熱試驗(yàn)　取供試品約50ml，置燒杯中，在砂浴上加熱至280℃，升溫速率為每分鐘上升10℃，觀察油的顏色和其他性狀的變化。

雜質(zhì)　取供試品約20g，精密稱定，置錐形瓶中，加石油醚（60～90℃）20ml使溶解，用干燥至恒重的垂熔玻璃坩堝濾過（如溶液不易濾過，可添加石油醚適量），用石油醚洗凈殘渣和濾器，在105℃干燥至恒重；精密稱定，增加的重量即為供試品中雜質(zhì)的重量。

水分與揮發(fā)物　取供試品約5g，置干燥至恒重的扁形稱量瓶中，精密稱定，在105℃干燥40分鐘取出，置干燥器內(nèi)放冷，精密稱定重量；再在105℃干燥20分鐘，放冷，精密稱定重量，至連續(xù)兩次干燥后稱重的差異不超過0.001g，如遇重量增加的情況，則以增重前的一次重量為恒重。減失的重量，即為供試品中含有水分與揮發(fā)物的重量。

堿性雜質(zhì)　取新蒸餾的丙酮10ml、水0.3ml和0.04%溴酚藍(lán)乙醇溶液1滴，用0.01mol/L鹽酸溶液或0.01mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)至中性，精密加供試品10ml，搖勻，靜置，用鹽酸滴定液（0.01mol/L）滴定至上層液顯黃色，計算消耗的鹽酸滴定液（0.01mol/L）體積。

甲氧基苯胺值　避光快速操作。除另有規(guī)定外，取供試品0.5g，精密稱定（W），置25ml量瓶中，加異辛烷溶解并稀釋至刻度，作為供試品溶液，照紫外-可見分光光度法（通則0401），以異辛烷為空白，在350nm的波長處測定吸光度（A1）；另取10ml具塞試管2支，供試品管加供試品溶液5.0ml，空白管加異辛烷5.0ml，再各加0.25%的4-甲氧基苯胺的冰醋酸溶液1.0ml，振搖，暗處放置10分鐘，以空白管溶液作為空白，在350nm的波長處測定供試品管溶液的吸光度（A2）。照下式計算甲氧基苯胺值：

反式脂肪酸　除另有規(guī)定外，取供試品100mg，置50ml回流瓶中，加0.5mol/L氫氧化鈉甲醇溶液4ml，在水浴中加熱回流直至油滴消失（通常約10分鐘），放冷，加14%三氟化peng甲醇溶液5ml，再在水浴中加熱回流5分鐘，放冷，加異辛烷2ml，繼續(xù)在水浴中加熱回流1分鐘，放冷，加飽和氯化鈉溶液10ml，搖勻，靜置使分層，取上層液，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，作為供試品溶液。分別取油酸甲酯、反式油酸甲酯、亞油酸甲酯順反異構(gòu)體混合溶液和亞麻酸甲酯順反異構(gòu)體混合溶液適量，加異辛烷溶解并稀釋制成每1ml中約含油酸甲酯1mg、反式油酸甲酯1mg、亞油酸甲酯順反異構(gòu)體2.5mg、亞麻酸甲酯順反異構(gòu)體2.5mg的溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。脂肪酸甲酯和反式脂肪酸甲酯的參考保留時間見表2、表3。照氣相色譜法（通則0521）試驗(yàn)，采用以聚二氰丙基硅氧烷（或極性相近）為固定液的毛細(xì)管色譜柱（0.25mm×100m, 0.2μm），起始溫度為163℃，維持85分鐘，以每分鐘30℃的速率升溫至240℃，維持13分鐘；分流比45∶1；載氣流速為恒壓40psi；進(jìn)樣口溫度為250℃；檢測器溫度為250℃。取系統(tǒng)適用性溶液1μl注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，順-9，12-反-15-十八碳三烯酸甲酯（C18∶3c9c12t15）和亞麻酸甲酯（C18∶3c9c12c15）的分離度應(yīng)不小于1.0（必要時可適當(dāng)調(diào)整色譜系統(tǒng)參數(shù)滿足上述系統(tǒng)適用性要求，并確保供試品中相應(yīng)順反脂肪酸甲酯峰的分離度均不小于1.0；36種脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和典型反式脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的氣相色譜圖見圖1、圖2）。取供試品溶液1μl注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，按面積歸一化法計算供試品中各反式脂肪酸甲酯峰占所有脂肪酸甲酯總峰面積的百分含量。

圖1　36種脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液氣相色譜圖（C4∶0～C22∶1t13）

表2　脂肪酸甲酯參考保留時間

圖2　典型反式脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液氣相色譜圖

表3　反式脂肪酸甲酯參考保留時間

【附注】

1．溴化碘溶液　取研細(xì)的碘13.0g，置干燥的具塞玻瓶中，加冰醋酸1000ml，微溫使碘完quan溶解；另用吸管插入法量取溴2.5ml（或在通風(fēng)櫥中稱取7.8g），加入上述碘溶液中，搖勻，即得。為了確定加溴量是否合適，可在加溴前精密取出20ml，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，記錄消耗的體積（ml）；加溴后，搖勻，再精密取出20ml，加新制的碘化鉀試液10ml，再用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，消耗的體積（ml）應(yīng)略小于加溴前的2倍。

本液應(yīng)置具塞玻瓶內(nèi)，密塞，在暗處保存。

2．乙醇制氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）　取50%氫氧化鈉溶液2ml，加乙醇250ml，搖勻，即得（如溶液渾濁，配制后放置過夜，取上清液）。取在五氧化二磷干燥器中減壓干燥至恒重的基準(zhǔn)苯甲酸約0.2g，精密稱定，加乙醇10ml與水2ml溶解，加酚酞指示液2滴，用上述滴定液滴定至溶液顯持續(xù)淺粉紅色。每1ml乙醇制氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于12.21mg的苯甲酸。

本液應(yīng)置具橡皮塞的棕色玻瓶中，密閉保存，臨用前應(yīng)標(biāo)定濃度。

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